過去の質問を「原形質分離」や「浸透圧」、「固定」と検索しても同様の質問がなかったため、初めて質問させていただきます。
原形質分離の実験を、オオカナダモの葉を用いて行いました。
しかし、一度固定したオオカナダモの葉では、原形質分離が起きませんでした。
このことについてご教授お願いいたします。

高張液は５％塩化ナトリウム水溶液です。
固定処理：固定液は、９９％エタノール、４５％酢酸、１０％ホルムアルデヒドの３種類を用いました。いずれの溶液にも数十秒ほど葉を漬け、水洗してから、高張液に漬けました。

５％塩化ナトリウム水溶液を選んだ理由は、別の実験で使っている溶液で、その浸透圧による細胞の変化を、細胞が大きく、観察の容易なオオカナダモをモデル細胞として利用したためです。

実験をしてみると、５％塩化ナトリウム水溶液では、オオカナダモのどの細胞も原形質分離をしておりました。スクロース水溶液を高張液として用いた場合に比べて強く原形質分離を起こしている印象でした。
しかし、固定処理したのち、５％塩化ナトリウム水溶液に浸すと、どの細胞も原形質分離が起きませんでした。

ここで、２つの点を考察しました。

１）固定処理によって、細胞膜に大きな穴が開き、細胞膜の半透性が失われたため。
２）固定処理によって、膜タンパク質が変性し、アクアポリンのような水分子チャネルが壊れたため、水分子が透過しにくくなったため。（前提として、細胞膜を極性分子の水分子が通りにくいという考えがあります）

これらを証明するために、膜タンパク質を含まない、人工のリン脂質二重膜（内部にオオカナダモの葉と同程度の着色した液を入れておく）に固定処理をし、高張液に浸せばよいと考えておりますが、その具体的な方法がわかっておりません。その実験方法についても、アドバイスいただければと思います。よろしくお願いいたします。